रोगाणुरहित कक्ष मानकीकरण प्रक्रियाएं और स्वीकृति विनिर्देश

1. उद्देश्य: इस प्रक्रिया का उद्देश्य रोगाणुरोधी संचालन और बाँझ कमरों की सुरक्षा के लिए एक मानकीकृत प्रक्रिया प्रदान करना है।

2. उपयोग का दायरा: जैविक परीक्षण प्रयोगशाला

3. जिम्मेदार व्यक्ति: गुणवत्ता नियंत्रण पर्यवेक्षक परीक्षक

4. परिभाषा: कोई नहीं

5. सुरक्षा सावधानियां

सूक्ष्मजीवों से होने वाले संक्रमण को रोकने के लिए पूरी तरह से रोगाणुरहित प्रक्रियाओं का पालन करें; ऑपरेटरों को रोगाणुरहित कमरे में प्रवेश करने से पहले यूवी लैंप बंद कर देना चाहिए।

6. प्रक्रियाएँ

6.1. रोगाणुरहित कक्ष में एक रोगाणुरहित ऑपरेशन कक्ष और एक बफर कक्ष होना चाहिए। रोगाणुरहित ऑपरेशन कक्ष की स्वच्छता 10000 श्रेणी की होनी चाहिए। कमरे का तापमान 20-24°C और आर्द्रता 45-60% बनाए रखना चाहिए। क्लीन बेंच की स्वच्छता 100 श्रेणी की होनी चाहिए।

6.2. रोगाणु रहित कमरे को साफ रखा जाना चाहिए, और संदूषण को रोकने के लिए मलबे का ढेर लगाना सख्त वर्जित है।

6.3. सभी नसबंदी उपकरणों और संवर्धन माध्यमों के संदूषण को सख्ती से रोकें। जो दूषित हो गए हों, उनका उपयोग बंद कर दें।

6.4. रोगाणु रहित कमरे में कार्यशील सांद्रता वाले कीटाणुनाशक जैसे 5% क्रेसोल घोल, 70% अल्कोहल, 0.1% क्लोरमेथियोनीन घोल आदि उपलब्ध होने चाहिए।

6.5. यह सुनिश्चित करने के लिए कि कीटाणुरहित कमरे की स्वच्छता आवश्यकताओं को पूरा करती है, कीटाणुरहित कमरे को नियमित रूप से उपयुक्त कीटाणुनाशक से कीटाणुरहित और साफ किया जाना चाहिए।

6.6. सभी उपकरण, औजार, बर्तन और अन्य वस्तुएं जिन्हें रोगाणु-मुक्त कमरे में लाया जाना आवश्यक है, उन्हें कसकर लपेटकर उचित विधियों द्वारा रोगाणु-मुक्त किया जाना चाहिए।

6.7. रोगाणु-मुक्त कक्ष में प्रवेश करने से पहले, कर्मचारियों को साबुन या कीटाणुनाशक से हाथ धोना चाहिए, और फिर बफर कक्ष में विशेष कार्य वस्त्र, जूते, टोपी, मास्क और दस्ताने पहनना चाहिए (या रोगाणु-मुक्त कक्ष में प्रवेश करने से पहले अपने हाथों को 70% इथेनॉल से फिर से पोंछना चाहिए)। जीवाणु-मुक्त कक्ष में कार्य करें।

6.8. रोगाणु-मुक्त कक्ष का उपयोग करने से पहले, उसमें लगी पराबैंगनी लैंप को 30 मिनट से अधिक समय तक विकिरण और रोगाणु-मुक्ति के लिए चालू करना आवश्यक है, और साथ ही स्वच्छ बेंच को भी वायु प्रवाह के लिए चालू करना आवश्यक है। प्रक्रिया पूरी होने के बाद, रोगाणु-मुक्त कक्ष को समय पर साफ किया जाना चाहिए और फिर 20 मिनट के लिए पराबैंगनी प्रकाश से रोगाणु-मुक्त किया जाना चाहिए।

6.9. जांच से पहले, परीक्षण नमूने की बाहरी पैकेजिंग को बरकरार रखा जाना चाहिए और संदूषण से बचने के लिए इसे खोला नहीं जाना चाहिए। जांच से पहले, बाहरी सतह को कीटाणुरहित करने के लिए 70% अल्कोहल से भीगी हुई रुई का उपयोग करें।

6.10. प्रत्येक ऑपरेशन के दौरान, रोगाणुरोधी ऑपरेशन की विश्वसनीयता की जांच करने के लिए एक नकारात्मक नियंत्रण किया जाना चाहिए।

6.11. जीवाणुयुक्त तरल को अवशोषित करते समय, इसे सोखने के लिए सक्शन बॉल का उपयोग करें। स्ट्रॉ को सीधे अपने मुंह से न छुएं।

6.12. प्रत्येक उपयोग से पहले और बाद में इनोक्यूलेशन सुई को लौ से कीटाणुरहित किया जाना चाहिए। ठंडा होने के बाद, कल्चर को इनोक्यूलेट किया जा सकता है।

6.13. जीवाणुयुक्त तरल पदार्थ वाले स्ट्रॉ, टेस्ट ट्यूब, पेट्री डिश और अन्य बर्तनों को कीटाणुशोधन के लिए 5% लाइसोल घोल वाले स्टेरिलाइज़ेशन बाल्टी में भिगोया जाना चाहिए, और 24 घंटे बाद निकालकर धोया जाना चाहिए।

6.14. यदि मेज या फर्श पर जीवाणुयुक्त तरल पदार्थ गिर जाए, तो उपचार करने से पहले तुरंत दूषित क्षेत्र पर कम से कम 30 मिनट के लिए 5% कार्बोलिक एसिड घोल या 3% लाइसोल डालें। यदि काम के कपड़े और टोपी जीवाणुयुक्त तरल पदार्थ से दूषित हो जाएं, तो उन्हें तुरंत उतारकर उच्च दाब वाली भाप से कीटाणुरहित कर लेना चाहिए।

6.15. जीवित जीवाणु युक्त सभी वस्तुओं को नल के नीचे धोने से पहले कीटाणुरहित करना आवश्यक है। सीवर को प्रदूषित करना सख्त वर्जित है।

6.16. रोगाणु-मुक्त कमरे में बैक्टीरिया कॉलोनियों की संख्या की जाँच मासिक रूप से की जानी चाहिए। क्लीन बेंच को खुला रखते हुए, 90 मिमी आंतरिक व्यास वाली कुछ रोगाणु-मुक्त पेट्री डिश लें और उनमें लगभग 15 मिलीलीटर पोषक अगर कल्चर मीडियम डालें, जिसे पिघलाकर लगभग 45°C तक ठंडा किया गया हो। जमने के बाद, इसे 30 से 35°C के इनक्यूबेटर में उल्टा करके 48 घंटे के लिए रखें। रोगाणु-मुक्ति सुनिश्चित होने के बाद, 3 से 5 प्लेटें लें और उन्हें कार्य स्थान के बाएँ, मध्य और दाएँ ओर रखें। ढक्कन खोलकर 30 मिनट तक खुला रखने के बाद, उन्हें 30 से 35°C के इनक्यूबेटर में उल्टा करके 48 घंटे के लिए रखें और फिर निकाल लें। जाँच करें। श्रेणी 100 के स्वच्छ क्षेत्र में प्लेट पर विविध बैक्टीरिया की औसत संख्या 1 कॉलोनी से अधिक नहीं होनी चाहिए, और श्रेणी 10000 के स्वच्छ कमरे में औसत संख्या 3 कॉलोनियों से अधिक नहीं होनी चाहिए। यदि सीमा का उल्लंघन होता है, तो रोगाणु-मुक्त कमरे को तब तक पूरी तरह से कीटाणुरहित किया जाना चाहिए जब तक कि बार-बार किए गए निरीक्षण आवश्यकताओं को पूरा न कर लें।

7. "दवा स्वच्छता निरीक्षण विधियाँ" और "चीन की दवा निरीक्षण के लिए मानक संचालन पद्धतियाँ" में अध्याय (नसबंदी निरीक्षण विधि) देखें।

8. वितरण विभाग: गुणवत्ता प्रबंधन विभाग

क्लीन रूम के लिए तकनीकी मार्गदर्शन:

रोगाणु-मुक्त वातावरण और रोगाणु-मुक्त सामग्री प्राप्त करने के बाद, किसी विशिष्ट ज्ञात सूक्ष्मजीव का अध्ययन करने या उनके कार्यों का उपयोग करने के लिए हमें रोगाणु-मुक्त अवस्था बनाए रखना आवश्यक है। अन्यथा, बाहर से विभिन्न सूक्ष्मजीव आसानी से उसमें मिल सकते हैं। बाहर से अप्रासंगिक सूक्ष्मजीवों के मिलने की इस घटना को सूक्ष्मजीवविज्ञान में संदूषक जीवाणु कहा जाता है। संदूषण को रोकना सूक्ष्मजीवविज्ञानिक कार्य में एक महत्वपूर्ण तकनीक है। पूर्ण रोगाणु-मुक्ति और संदूषण की रोकथाम, रोगाणु-मुक्त तकनीक के दो पहलू हैं। इसके अलावा, हमें अध्ययन किए जा रहे सूक्ष्मजीवों, विशेष रूप से रोगजनक सूक्ष्मजीवों या आनुवंशिक रूप से संशोधित सूक्ष्मजीवों, जो प्रकृति में मौजूद नहीं हैं, को हमारे प्रायोगिक पात्रों से बाहरी वातावरण में निकलने से रोकना चाहिए। इन उद्देश्यों के लिए, सूक्ष्मजीवविज्ञान में कई उपाय हैं।

रोगाणुरोधी कक्ष आमतौर पर सूक्ष्मजीव विज्ञान प्रयोगशाला में विशेष रूप से बनाया गया एक छोटा कमरा होता है। इसे चादरों और कांच से बनाया जा सकता है। इसका क्षेत्रफल बहुत बड़ा नहीं होना चाहिए, लगभग 4-5 वर्ग मीटर और ऊंचाई लगभग 2.5 मीटर होनी चाहिए। रोगाणुरोधी कक्ष के बाहर एक बफर कक्ष बनाया जाना चाहिए। बफर कक्ष और रोगाणुरोधी कक्ष के दरवाजे एक ही दिशा में नहीं होने चाहिए ताकि वायु प्रवाह से विभिन्न प्रकार के जीवाणुओं का प्रवेश रोका जा सके। रोगाणुरोधी कक्ष और बफर कक्ष दोनों वायुरोधी होने चाहिए। आंतरिक वेंटिलेशन उपकरणों में वायु निस्पंदन उपकरण लगे होने चाहिए। रोगाणुरोधी कक्ष का फर्श और दीवारें चिकनी होनी चाहिए, ताकि उन पर गंदगी न जमे और उन्हें साफ करना आसान हो। कार्य सतह समतल होनी चाहिए। रोगाणुरोधी कक्ष और बफर कक्ष दोनों में पराबैंगनी प्रकाश लगे होने चाहिए। रोगाणुरोधी कक्ष में पराबैंगनी प्रकाश कार्य सतह से 1 मीटर की दूरी पर होना चाहिए। रोगाणुरोधी कक्ष में प्रवेश करने वाले कर्मचारियों को रोगाणुरहित कपड़े और टोपी पहननी चाहिए।

वर्तमान में, रोगाणु-रहित कमरे अधिकतर सूक्ष्मजीव विज्ञान कारखानों में पाए जाते हैं, जबकि सामान्य प्रयोगशालाओं में क्लीन बेंच का उपयोग किया जाता है। क्लीन बेंच का मुख्य कार्य सतह पर मौजूद सूक्ष्मजीवों सहित विभिन्न सूक्ष्म कणों को हटाने के लिए लैमिनर वायु प्रवाह उपकरण का उपयोग करना है। विद्युत उपकरण के माध्यम से वायु को हेपा फिल्टर से गुजारकर सतह पर भेजा जाता है, जिससे सतह पर हमेशा रोगाणु-रहित वायु का प्रवाह बना रहता है। इसके अलावा, बाहरी वायु के प्रवेश को रोकने के लिए बाहर की ओर एक उच्च गति वाला वायु पर्दा लगा होता है।

कठिन परिस्थितियों वाले स्थानों में, क्लीन बेंच के स्थान पर लकड़ी के स्टेराइल बॉक्स का उपयोग किया जा सकता है। स्टेराइल बॉक्स की संरचना सरल है और इसे आसानी से स्थानांतरित किया जा सकता है। बॉक्स के सामने दो छेद हैं, जो उपयोग में न होने पर पुश-पुल दरवाजों से बंद रहते हैं। उपयोग के दौरान आप अपने हाथ अंदर डाल सकते हैं। आंतरिक संचालन को सुगम बनाने के लिए सामने के ऊपरी भाग में कांच लगा है। बॉक्स के अंदर एक पराबैंगनी लैंप है, और बर्तन और बैक्टीरिया को बगल में बने छोटे दरवाजे से अंदर डाला जा सकता है।

रोगाणुरोधी संचालन तकनीकें न केवल सूक्ष्मजीवविज्ञानीय अनुसंधान और अनुप्रयोगों में महत्वपूर्ण भूमिका निभाती हैं, बल्कि कई जैव प्रौद्योगिकी में भी व्यापक रूप से उपयोग की जाती हैं। उदाहरण के लिए, ट्रांसजेनिक तकनीक, मोनोक्लोनल एंटीबॉडी तकनीक आदि।